什么是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗：
在GB4789.14標準中，在進行蠟樣芽胞桿菌鑒定時蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應(yīng)相同，但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時，會在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規(guī)則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體，稱為伴孢晶體，該晶體易被堿性染料著色，因此常用0.5%堿性復(fù)紅染料進行染色觀察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產(chǎn)生伴孢晶體。這個染色實驗就是蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗。
操作步驟：
培養(yǎng)芽孢：將待測菌株接種至硫酸錳營養(yǎng)瓊脂平板，30±1℃培養(yǎng)24±2h，并于室溫放置3-4天。若芽孢產(chǎn)生不豐富，可在室溫繼續(xù)放置2-3天后觀察。
原理：芽孢桿菌在營養(yǎng)條件缺乏時，開始形成芽孢，因此在進行細菌產(chǎn)芽孢相關(guān)試驗時，通常需進行5-7天的放置或培養(yǎng)，待培養(yǎng)基內(nèi)營養(yǎng)耗盡，可獲得更豐富的芽孢。
制片染色：挑取培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用 30 s 后傾去，再通過火焰干燥，于載玻片上滴滿 0.5%堿性復(fù)紅，放火焰上加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù) 1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色 30 s，傾去染液用潔凈自來水*清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形蛋白結(jié)晶體。
（注：在菌苔生長密集的地方營養(yǎng)消耗更快，更容易產(chǎn)生芽孢，因此挑取密集生長處的菌苔制片易觀察到更多芽孢）
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